（1）了解仪器各部分的构造和功能及分析的原理
（2）掌握样品、流动相的处理、仪器的维护等基本知识
（3）学会简单样品的分析操作过程
（4）掌握HPLC分析的定性、定量方法
2.基本原理
高效液相色谱仪以液体作为流动相，并采用颗粒极细的高效固定相的主色谱分离技术，在基本理论方面与气相色谱没有显著不同，它们之间的重大差别在于作为流动相的液体与气体之间的性质差别。与气相色谱相比，高效液相色谱对样品的适用性强，不受分析对象挥发性和热稳定性的限制，可以弥补气相色谱法的不足。
对于酚类化合物的测定，其基本原理是这样的：先用固相小柱吸附水中酚类化合物，然后用溶剂洗脱，经氮吹气浓缩至一定体积后，用反相高压液相色谱法分析。在反相色谱柱上以甲醇/（水+乙酸）为流动相把经预处理的酚类化合物分离，用二极阵列检测器或紫外检测器，测定各种酚的峰高或峰面积，以外标法定量。
3.仪器与试剂
3.1仪器：高效液相色谱仪：可编程紫外检测器
微量注射器：50μL、100μL
色谱柱：C18或C8柱
化学工作站
尖底浓缩瓶：10ml 具刻度
富集柱
3.2试剂：流动相：甲醇/高纯水(需Φ0.22μm滤膜过滤)
标准物：六种酚类混合物
洗脱液：正己烷、 四氢呋喃(需重蒸)
硫酸
冰醋酸
无水亚硫酸钠
4.所用仪器的主要组件
(1) 高压输液泵
主要部件之一，压力：150×105～350×105 Pa。
为了获得高柱效而使用粒度很小的固定相(
应具有压力平稳、脉冲小、流量稳定可调、耐腐蚀等特性。
(2) 梯度淋洗装置
外梯度（高压梯度）：用两台高压输液泵，将两种不同极性的溶剂按一定的比例送入梯度混合室，混合后进入色谱柱。
内梯度（低压梯度）：一台高压泵，通过比例调节阀，将两种或多种不同极性的溶剂按一定的比例抽入高压泵中混合。
(3) 进样装置
流路中为高压力工作状态，通常使用耐高压的六通阀进样装置。
(4) 高效分离柱
柱体为直形不锈钢管，内径1～6 mm，柱长5～40 cm。发展趋势是减小填料粒度和柱径以提高柱效。
(5) 液相色谱检测器
Ⅰ 紫外检测器
应用最广，对大部分有机化合物有响应。
特点：灵敏度高，线形范围宽；流通池可做得很小(1mm×10mm，容积8μL)；对流动相的流速和温度变化不敏感；波长可选，易于操作；可用于梯度洗脱。
Ⅱ 光电二极管阵列检测器
光电二极管阵列检测器：1024个二极管阵列，各检测特定波长，计算机快速处理，三维立体谱图。
Ⅲ 示差折光检测器
除紫外检测器之外应用最多的检测器。可连续检测参比池和样品池中流动相之间的折光指数差值。差值与浓度成正比。
Ⅳ 荧光检测器
高灵敏度，高选择性。对多环芳烃，维生素B、黄曲霉素、卟啉类化合物、农药、药物、氨基酸、甾类化合物等有响应。
5.数据处理
（1）原始数据
实验所得色谱图
①根据标准样品的实验数据，做出峰面积随浓度变化的标准曲线。
②根据标准曲线，计算实际单标中的物质浓度
单标为8ppm的标样物质实际浓度： C=7.990ppm
1、熟悉酚的基本性质；
2、掌握酚的鉴别方法。
二、实验原理
酚的分子中，由于羟基中的氧原子与苯环形成P-π共轭，电子云向苯环偏移，溶于水后可以电离出氢离子，显示弱酸性。
但是苯酚的酸性比碳酸弱。若将苯酚钠与碳酸钠溶液反应，可以析出苯酚。用这种方法可以分离苯酚。
苯酚可以和NaOH反应，但不与NaHCO3反应。
利用醇、酚与NaOH和NaHCO3反应性的不同，可鉴别和分离酚和醇。
苯酚与溴水在常温下可立即反应生成2，4，6-三溴苯酚白色沉淀。反应很灵敏，很稀的苯酚溶液就能与溴水生成沉淀。故此反应可用作苯酚的鉴别和定量测定。
（白色）
酚类可以与FeCl3溶液反应显色，用于鉴别酚类。苯酚可以用于制备酚酞。
棕红色 蓝紫色
三、实验器材
仪器：试管、试管架、试管夹、酒精灯、pH试纸
无机试剂： NaOH（5％），饱和溴水， NaHCO3(5％,饱和)，的Na2CO3(5％)，
5％FeCl3 ，HCl(5％)溶液；
有机试剂：苯酚
四、实验步骤
1、酚的溶解性和弱酸性
将0.2 g的苯酚放在试管中，加入3mL水，振荡试管后观察是否溶解。用玻璃棒蘸1滴溶液，以广泛pH试纸测定其酸碱性。然后再加热试管，直到苯酚全部溶解。
将上述溶液分装在3支试管中，冷却后出现浑浊，在其中一支试管中加入2～3滴5％的NaOH溶液，观察是否溶解。再滴加5％的盐酸，有何变化？在另2支试管中分别加入5％的NaHCO3溶液和5％的Na2CO3溶液，观察是否溶解。
2、酚类与FeCl3溶液的显色反应
在试管中加入1%苯酚0.5mL，再加入1～2滴1% FeCl3溶液，观察和记录各试管中所显示的颜色。
3、与溴水的反应
在1支试管中加入2滴苯酚饱和水溶液，再加2 mL水稀释，在另一只试管中加入2 mL自来水，然后在两只试管中逐滴加入饱和溴水，比较两只试管中的现象。写出反应方程式。
五、思考题
1、如何鉴别醇和酚？
2、举例说明具有什么结构的化合物能与FeCl3溶液发生显色反应？
3、为什么苯酚比苯和甲苯容易发生溴代反应？
1.进行醇和酚主要化学性质的实验操作。
2.熟练进行水浴加热和点滴板使用的操作。
3.能较快地设计出①伯醇、仲醇与叔醇；②一元醇与多元醇；③醇与酚类物质的鉴别方案，并进行实验操作。
4.具有严肃和实事求是的科学态度，养成爱护公物，节省试剂的良好品德。
【实验用品】
金属钠、无水乙醇、酚酞试剂、仲丁醇、叔丁醇、蒸馏水、卢卡斯试剂、1.5mol/L 硫酸、0.17mol/L重铬酸钾溶液、100g/L NaOH溶液、乙醇、醋酸、48g/L CuSO4溶液、甘油、蓝色石蕊试纸、0.1mol/L苯酚溶液、饱和碳酸钠溶液、饱和碳酸氢钠溶液、溴水、0.06mol/L三氯化铁溶液、0.03mol/L高锰酸钾溶液、浓硫酸。
试管、烧杯、酒精灯、玻璃棒、点滴板、广泛pH试纸、表面皿。
【实验原理】
羟基是醇的官能团、O－H键和C－O键容易断裂发生化学反应；同时，α-H和β-H有一定的活泼性，使得醇能发生氧化反应、消除反应等；而邻多元醇除了具有一般醇的化学性质，由于它们分子中相邻羟基的相互影响，具有一些特殊的性质，如甘油能与Cu(OH)2作用。 酚类化合物分子中含有羟基，O－H键已发生断裂，在水溶液中能电离出少量氢离子，使酚溶液显示弱酸性；－OH受苯环上大π键的影响，使得C－OH键显示一定的活性，易发生氧化反应；而苯环也受－OH的影响，使得苯环上的H的活性增强，易发生取代反应。
【实验指导】（实验内容、步骤、操作事项）
一、醇的化学性质
1. 醇钠的生成及水解
在干燥试管中，加入无水乙醇1mL，并加一小粒新切的、用滤纸擦干的金属钠，观察反应放出的气体和试管是否发热。随着反应的进行，试管内溶液变稠。当钠完全溶解后，冷却，试管内溶液逐渐凝结成固体。然后滴加水直到固体消失，再加一滴酚酞试液，观察并解释发生的变化。
2. 醇的氧化
取4支试管，分别加入5滴仲丁醇、叔丁醇和蒸馏水，然后各加入10滴1.5mol/L硫酸和0.17mol/L重铬酸钾溶液，振摇，观察并及时记录出现变化快慢的时间。
3. 与卢卡斯试剂反应
取3支试管，分别各加入5滴仲丁醇、叔丁醇，在50～60℃水浴中加热，然后同时向3支试管中各加入5滴卢卡斯试剂，振摇、静置，观察并解释产生的现象。
4. 甘油与氢氧化铜反应
取2支试管各加入10滴100g/L NaOH溶液和48g/L CuSO4溶液，混匀后，分别加入乙醇、甘油各10滴，振摇，静置，观察现象并解释发生的变化。
二、酚的化学性质
（一） 酚的弱酸性
1. 测定苯酚溶液的pH
各取2滴0.1mol/L苯酚溶液于点滴板凹穴中，将湿润的蓝色石蕊试纸和pH试纸与凹穴接触，观察并读出pH。用玻璃棒分别蘸取0.1mol/L苯酚溶液至蓝色石蕊试纸和广泛pH试纸上，观察并读出pH。
2. 苯酚与氢氧化钠的反应
向试管里加入1mL苯酚混浊液，逐滴入100g/L NaOH溶液，振摇，观察现象并解释。
3. 苯酚与碳酸钠的反应
取两支试管，分别加入20滴0.1mol/L苯酚溶液，往一支试管中加入10滴饱和碳酸钠，另一支试管中加入20滴饱和碳酸氢钠，振摇，观察现象并解释发生的变化。
（二） 苯酚与溴的反应
在试管中加入5滴0.1mol/L苯酚溶液，逐滴加入饱和溴水，振摇至白色沉淀生成，观 察并解释发生的变化。
（三） 酚与三氯化铁的显色反应
取3支试管，分别向3支试管中加入10滴0.1mol/L苯酚溶液，再各加入1滴0.06mol/L 三氯化铁溶液，振摇，观察现象并解释发生的变化。
（四） 酚的氧化反应
在试管中滴入20滴0.1mol/L苯酚溶液，再滴10滴100g/L NaOH溶液，最后滴加2～3滴0.03mol/L高锰酸钾溶液，观察并解释所发生的`变化。
【问题与讨论】
1. 用化学方法鉴别下列各组化合物：
（1）丙醇与异丙醇（2）丙醇与丙三醇
（3）苯、环己醇、苄醇与苯酚（4）乙醇与苯酚
2. 在配制卢卡斯试剂时应注意些什么？为什么可用卢卡斯试剂来鉴别伯醇、伯醇和叔醇？此反应用于鉴别有什么限制？
3. 苯酚为什么能溶于氢氧化钠和碳酸钠溶液中，而不溶于碳酸氢钠溶液？