实验报告[荐](通用6篇)
一、实验目的和要求
1、通过乙酸乙酯的制备,加深对酯化反应的理解;
2、了解提高可逆反应转化率的实验方法;
3、熟练蒸馏、回流、干燥、气相色谱、液态样品折光率测定等技术。
二、实验内容和原理
本实验用乙酸与乙醇在少量浓硫酸催化下反应生成乙酸乙酯:
副反应:
由于酯化反应为可逆反应,达到平衡时只有2/3的物料转变为酯。为了提高酯的产率,通常都让某一原料过量,或采用不断将反应产物酯或水蒸出等措施,使平衡不断向右移动。因为乙醇便宜、易得,本实验中乙醇过量。但在工业生产中一般使乙酸过量,以便使乙醇转化完全,避免由于乙醇和水及乙酸乙酯形成二元或三元共沸物给分离带来困难,而乙酸通过洗涤、分液很容易除去。
由于反应中有水生成,而水和过量的乙醇均可与乙酸乙酯形成共沸物,如表一表示。这些共沸物的沸点都很低,不超过72℃,较乙醇的沸点和乙酸的沸点都低,因此很容易被蒸馏出来。蒸出的粗馏液可用洗涤、分液除去溶于其中的乙酸、乙醇等,然后用干燥剂去除共沸物中的水分,再进行精馏便可以得到纯的乙酸乙酯产品。
表一、乙酸乙酯共沸物的组成与沸点
三、主要物料及产物的物理常数
表二、主要物料及产物的物理常数
四、主要仪器设备
仪器100mL三口烧瓶;滴液漏斗;蒸馏弯头;温度计;直形冷凝管;250mL分液漏斗;50mL锥形瓶3个;25mL梨形烧瓶;蒸馏头;阿贝(Abbe)折光仪;气相色谱仪。
试剂冰醋酸;无水乙醇;浓硫酸;Na2CO3饱和溶液;CaCl2饱和溶液;NaCl饱和溶液。
五、实验步骤及现象
表三、实验步骤及现象
实验装置图:
六、实验结果与分析
由粗产品洗涤、蒸馏后得三瓶分馏产物,均为无色果香味液体,其质量如下:
1.前馏分(温度稳定以前):43.38g-35.15g(1号锥形瓶质量)=8.13g;
2.中馏分(温度稳定在76℃时):39.72g-32.67g(2号锥形瓶质量)=7.05g;
3.后馏分(温度迅速下降后):34.28g-31.25g(3号锥形瓶质量)=3.08g。
取中馏分在气相色谱仪上测定纯度,测得乙酸乙酯含量为99.9243%。另有一种杂质,含量为0.0757%,预计为未洗净的乙醇,因为过量Na2CO3未洗净,部分CaCl2与之反应生成了CaCO3,剩余的CaCl2不能把乙醇全部除尽。因此纯度虽然较高,但仍有可以改进之处。
在阿贝折光仪上测得室温(20℃)下折光率为1.3727。
七、思考题
1、利用可逆反应进行合成时,选择何种原料过量时,需要考虑哪几种因素?
答:通常过量的原料必须具有以下优点:相对成本较低、易得、对环境和人体的影响更小、引入的副反应更少、反应完成后更容易从体系中去除或回收。
2、粗乙酸乙酯中含有哪些杂质?
答:未反应完全的乙醇、乙酸,酯化反应同时生成的水,溶入的极少的硫酸等。若酯化反应温度控制不当,高于140℃,乙醇分子间脱水,会有乙醚生成;高于170℃,乙醇分子内脱水,会生成乙烯。
3、能否用浓NaOH溶液代替饱和Na2CO3溶液洗涤?
答:不能。酯化反应是可逆反应,生成的乙酸乙酯在强碱作用下很容易水解成乙醇和乙酸,影响产率。且加入饱和Na2CO3溶液有CO2放出,可以指示中和是否完成,不易加碱过量。另外Na2CO3能跟挥发出的乙酸反应,生成没有气味的乙酸钠,便于闻到乙酸乙酯的香味。
4、用饱和CaCl2溶液洗涤能除去什么?为什么要用饱和NaCl溶液洗涤?是否能用水代替?
答:用饱和CaCl2溶液洗涤是为了除去乙酸乙酯中溶入的少量乙醇。
用饱和NaCl溶液洗涤是为了除去过量的Na2CO3,否则在下一步用饱和CaCl2溶液洗涤时会产生絮状的CaCO3沉淀。
不能用水代替。因为乙酸乙酯在水中有一定的溶解度,加入NaCl可以减小乙酸乙酯的溶解度,也就减少了这一步洗涤带来的产物损失。另外也增加了水层的密度,分液时更容易分层,避免出现乳化现象。
八、讨论、心得
1、实验操作注意点
(1)反应温度必须控制好,太高或太低都将影响到最后的结果。太高,会增加副产物乙醚的生成量,甚至生成亚硫酸;太低,反应速率和产率都会降低。
(2)反应过程中,滴加速度也要严格控制。速度太快,反应温度会迅速下降,同时会使乙醇和乙酸来不及发生反应就被蒸出,影响产率。
(3)乙酸乙酯可与水或醇形成二元或三元共沸物,共沸物的形成将影响到馏分的沸程。共沸物的组成及沸点见表一。
(4)滴液漏斗、分液漏斗等带活塞的仪器在使用前都要先检漏。
(5)浓硫酸在本反应中起到催化、吸水的作用,故用量比较多。
(6)因为本实验中水的存在对反应平衡有影响,所以所有仪器都必须干燥,且选取基本不含水的冰醋酸和无水乙醇反应。
2、关于乙酸乙酯
乙酸乙酯在工业上的.用途很广,主要用作溶剂及染料和一些医药中间体的合成。
虽然乙酸乙酯属于低级酯,有果香味,少量吸入对人体无害。但它易挥发,其蒸气对眼、鼻、咽喉有刺激作用,高浓度吸入有麻醉作用,会引起急性肺水肿,并损害肝、肾。持续大量吸入,可致呼吸麻痹。误服者可产生恶心、呕吐、腹痛、腹泻等。有致敏作用,会引发血管神经障碍而致牙龈出血;还可致湿疹样皮炎。若长期接触,有时可致角膜混浊、继发性贫血、白细胞增多等。为了减少对实验者健康的危害,相关操作都应在通风橱中进行。
乙酸乙酯是易燃物,其蒸气与空气可形成爆炸性混合物,遇明火、高热能引起燃烧爆炸,爆炸上限为11.5%,爆炸下限为2%(体积分数)。与氧化剂接触猛烈反应。其蒸气比空气重,能在较低处扩散到相当远的地方,遇火源会着火回燃。因此实验合成的乙酸乙酯不能直接倒入水池,必须回收处理。
3、阿贝折光仪及折光率测定
阿贝折光仪的结构示意图:
1.底座;
2.棱镜调节旋钮;
3.圆盘组(内有刻度板);
4.小反光镜;
5.支架;
6.读数镜筒;
7.目镜;
8.观察镜筒;
9.分界线调节螺丝;
10.消色凋节旋钮;
11.色散刻度尺;
12.棱镜锁紧扳手;
13.棱镜组;
14.温度计插座;
15.恒温器接头;
16保护罩;
17主轴;
18反光镜
测定时,试样置于测量棱镜P的镜面F上,棱镜的折光率大于试样的折光率。如果入射光I正好沿着棱镜与试样的界面F射入,会发生全反射:其折射光为零,入射角90°,折射角为角1’0N’,即临界角。大于临界角的区域构成暗区,小于临界角的构成亮区。
化合物的折光率除与本身的结构和光线的波长有关外,还受温度等因素的影响。所以在报告折光率时必须注明所用光线(放在n的右下角)与测定时的温度(放在折光率n的右上角)。例如=1.4699表示20℃时,某介质对钠光(D线)的折光率为1.4699。
物质结构是折光率产生差异的根本原因。不同的物质有不同的立体构象。这使得物质对光线得吸收程度以及反射程度产生差异,使得折光率产生根本性的差异。
物质的折光率因光的波长而异,波长较长折射率较小,波长较短折射率较大。
实验内容:想办法把土壤中的砂和粘土分开。
材料:(装置)烧杯、玻璃棒、水、土壤等。
步骤:
1、在烧杯中装半杯水,把土壤慢慢倒入水中。
2、用玻璃棒沿着一个方向轻轻搅拌。
3、静置一会儿,观察水中的土壤。
现象:
1、土壤分成了两层。
2、上层的.土壤颗粒小,是粘土;下层的土壤颗粒大,是砂。
一、目的要求:
1、初步掌握岩浆分结矿床形成的地质条件及矿床特点。
2、了解矿床成矿作用与含矿岩浆分异作用之间的关系。
3、分析矿床成矿作用过程及矿床形成机理,了解矿床的分布规律,指导找矿和矿床评价。
二、实验内容:
陕西松树沟铬铁矿矿床
标本:
矿石:1-条带状铬铁矿、2-致密块状铬铁矿、3-稠密浸染状铬铁矿、4-中等浸染状铬铁矿、5-稀疏浸染状铬铁矿、6-星散浸染状铬铁矿。
矿体围岩:7-含斜辉橄榄岩、8-中粗粒纯橄榄岩、9-蛇纹石化橄榄岩、10-透辉岩。
蚀变岩:11-蛇纹岩、12-透闪石化蛇纹岩、13-滑石岩、14-蛭石岩。
超基性岩体的`主要围岩:15-斜长角闪片岩。
次生作用产物:16-菱镁矿。
三、标本观察
1、岩体围岩:注意岩体侵入围岩的岩石类型及其变质时代。
2、含矿岩体:注意根据主要矿物粒度认识细粒和中粗粒纯橄岩的特征,并根据矿物成分和含量区别纯橄岩和斜辉辉橄岩。
3、矿石:条带状构造:注意铬铁矿结晶粒度及组成条带在纯橄岩中的排列方向和规模判断是火成堆积或流动构造。浸染状构造:铬铁矿晶粒大小、密集程度和在矿体产出的部位。
四、思考题
1、超基性岩体的分布与大地构造的关系;
2、岩体中岩相分带特点,各相间相互关系及矿化与岩相空间分布关系;
3、岩体规模产状及其与围岩关系;
4、岩浆分异矿体和岩浆贯入矿体的空间分布及其与围岩的关系;
5、矿体产状规模及其分布特点;
6、分析带状构造矿石的成因。
参考数据:
1、铬矿石工业要求
原生矿工业品位:Cr2O3≥8~10%
原生矿边界品位:Cr2O3≥5~8%
砂矿工业品位:Cr2O3≥3%
砂矿边界品位:Cr2O3≥1.5%
2、铬铁矿:[(Mg,Fe)Cr2O3]含铬50~60%。
一、 实验目的和要求
掌握用友ERP-U8管理系统中有关系统管理和基础设置相关内容,区分系统管理员(admin)和账套主管各自的权限,理解系统管理在整个系统中的作用及基础设置的重要性。掌握总账系统初始参数的设置,理解总账系统初始设置的意义,熟悉总账系统日常业务处理的各种操作,掌握凭证管理、出纳管理和总账管理的具体内容和操作方法。熟悉总账系统月末处理业务的各种操作,掌握银行对账、自动转账设置与生成、对账和月末结账的操作方法。
二、 实验方法与步骤
1.启动系统管理开始—所有程序—用友ERP-U8—系统服务—系统管理
2.以系统管理员的身份登录系统管理系统—注册,打开注册系统管理对话框,输入操作员admim,密码为空,单击确定,进入系统管理
3.增加操作员权限—用户,进入用户管理窗口,单击增加按钮,按表中资料输入操作员
4.建立账套
账套—建立,打开创建账套对话框,按表中资料输入信息,然后启用系统
5.财务分工
权限—权限,进入操作员权限窗口,选择800账套,20xx年度,从左侧窗口操作员列表中依次选择各操作员,增加各自的权限,单击退出按钮,返回系统管理
6.基础设置
开始—程序—用友ERP-U8—企业门户,打开注册企业门户对话框,输入信息,单 击确定按钮,进入用友ERP-U8企业门户,在设置选项卡中,单击基础档案菜单项, 双击要设置的档案菜单,按所给资料依次输入数据
7.登录总账
开始—程序—用友ERP-U8—企业门户,打开登录对话框,输入信息,单击确定
8.设置总账控制参数
设置—选项,打开选项对话框,单击编辑按钮,分别按照实验资料进行设置
9.设置基础数据
(1)设置外币及汇率 设置—基础档案—财务—外币设置,打开外币设置对话框,单击增加按钮,输入 信息,单击退出按钮
(2)建立会计科目—增加明细会计科目 设置—基础档案—财务—会计科目,进入会计科目窗口,单击增加按钮,输入资 料中的'明细科目,继续单击增加按钮,输入资料中其他明细科目的内容
(3)建立会计科目—指定会计科目 在会计科目窗口中,执行编辑—指定科目命令,进入指定科目窗口,分别选择现 金总账科目,银行总账科目,现金流量科目单选按钮,将各自科目由待选科目选 入已选科目,单击确认按钮
(4)设置凭证类别 设置—基础档案—财务—凭证类别,选择收款凭证,付款凭证,转账凭证单选按 钮,单击确定按钮,单击修改按钮,单击凭证限制类型的下三角按钮,依次选择, 按资料输入限制科目
(5)设置结算方式
设置—基础档案—收付结算—结算方式,单击增加按钮,输入结算方式编码,名称,单击保存按钮,依次输入其他结算方式
(6)设置项目目录—定义项目大类
设置—基础档案—财务—项目目录,单击增加按钮,输入项目大类名称,单击下一步按钮,再单击下一步按钮,单击完成按钮
(7)设置项目目录—指定核算科目
在项目档案窗口中,单击核算科目选项卡,,选择项目大类,单击>按钮,将直接材料直接人工,制造费用及其明细科目选为参加核算的科目,单击确定按钮
(8)设置项目目录—定义项目分类
在项目档案窗口中,单击项目分类定义选项卡,单击右侧增加按钮,输入分类编码,名称,单击确定按钮,同理定义2委托开发项目
(9)设置项目目录—定义项目目录
在项目档案窗口中,单击项目目录选项卡,,单击右下角维护按钮,单击增加按钮,输入项目编号,名称,分类码,同理增加102项目档案
10、数据权限控制设置及分配
设置—数据权限—数据权限控制设置,记录级—科目—确定—数据权限—数据权限设置,从业务对象下拉列表中选择科目,从用户及角色列表框中选择003,单击授权按钮,将应收款项,预付款项,应付账款,预收账款,其他应收款从禁用列表中选入到可用列表中,单击保存按钮,从业务对象下拉列表中选择部门,单击授权按钮,将所有部门从禁用列表中选入到可用列表中,单击保存按钮
11、输入期初余额
设置—期初余额,依次录入各科目的累计发生额和期初余额,单击试算按钮,打开期初余额试算平衡表对话框,期初余额试算平衡,单击退出按钮.
12、以“马方”的身份注册进入企业门户填制凭证
财务会计----总账---凭证---填制凭证,进入填制凭证窗口,增加,添加一张空白凭证。选择“凭证类别”,输入制单日期,输入附单据数,按题目要求输入相关内容,并完成相关的内容,单击“保存”,弹出“凭证已保存成功”,单击“确定”。
13、查询凭证
凭证—查询凭证,打开凭证查询对话框,输入查询条件,--确定—进入查询凭证窗口。双击一凭证,可显示此张凭证。
14、修改凭证
凭证---填制凭证,进入填制凭证窗口,输入查询条件,--确定—进入查询凭证窗口。
找到要修改的凭证,进行修改,然后保存。
15、冲销凭证
凭证---填制凭证—制单—冲销凭证,打开冲销凭证对话框,输入相关内容,--确定。
16、删除凭证
凭证---填制凭证—制单—作废/恢复凭证。
17、整理凭证
凭证---填制凭证—制单—整理凭证—打开选择凭证期间对话框,输入相关内容,确定。
18、出纳签字
以“王晶”的身份登录,总账→凭证→出纳签字”打开出纳签字查询对话框—全部-.确认后弹跳出方框,白色方框表明还未签字,检查凭证是否完全正确,若完全正确,则单击 “出纳→成批出纳签字” 单击确定,方框变成蓝色且签字人下方空格都填上王晶,说明凭证都已签字。
审核凭证以“陈明”会计主管的身份登录,点击“确定”,登录后选择“总账→凭证→审核凭证”, 单击“确定”, 检查凭证是否完全正确,若检查无误,则选择“审核→成批审核”, 单击“确定”后,凭证审核完成凭证底部的审核处自动签上审核人的姓名
19、记账
单击“总账—凭证—记账”,单击“记账范围→全选”, 单击“下一步”, 单击“下一步”,然后单击“记账”,如果“期初试算平衡表”中试算平衡,就单击“确认”,弹出“记账完毕”,最后单击“确认”
20、现金日记账
以出纳身份登录,“出纳—日记账—现金日记账”,输入查询条件然后单击“确认”,双击一行,查看相应凭证,--退出。
21、银行日记账
“出纳—日记账—银行日记账”,输入查询条件然后单击“确认”,双击一行,查看相应凭证,--退出。
22、.单击选择“出纳→支票登记薄”, 选择科目工行存款,单击确定,单击增加,出现一条空格,输入相关信息,完成后退出。
23、查询基本会计核算账目
“帐表—科目账—余额表”,单击“确认”按钮,弹出余额表,对余额表进行查询,如果无误,则“退出”按钮。
“帐表—科目账—明细账”,单击“确认”按钮,弹出余额表,对明细账进行查询,如果无误,则“退出”按钮
“帐表—部门辅助账—部门明细账—部门明细账”,在部门选项中单击“搜索”,选中要查询的部门,然后单击“确认”按钮,弹出“部门明细账”,进行查询,如无误,则单击“退出”按钮
“帐表—部门辅助账—部门收支分析”,将选中的目标用下拉键拉到选项框,单击“下一步”,选择进行分析的月份,单击“完成”按钮,弹出“部门收支分析表”,按照查询步骤开始查询,最后单击“退出”按钮
24、银行对账
银行对账期初
“出纳→银行对账期初”,会跳出银行科目选择对话框,选择科目“工行存款”单击确定,跳出银行对账期初对话框,单击输入单位日记账调整前余额和银行对账单调整前余额后,再点击下方“对账单期初未达项”,跳出银行方期初对话框,点击增加,输入未达账项—银行已收企业未收款后,单击退出。
.银行对账单
“出纳--银行对帐→银行对账单”,跳出银行科目选择对话框,单击增加,跳出关于工行存款的银行对账单,输入完成后,
25、自动转账
以“马方”的身份进入,“总账—期末—转账定义—自定义转账”,点击“增加”,弹出“转账目录”对话框,按照格式填写内容,然后点击“确认”按钮,在“科目编码”中双击,弹出科目参照对话框,选中“财务费用”, 单击确定, 并在“金额公式”中导入计算公式,填写“应付利息”时,点击“增行”,在“科目编码”中选中“应付利息”,并在“金额公式”中导入计算公式,完成后,单击保存,退出。
26、转账生成
单击“总账→期末→转账生成”,弹出转账生成对话框,单击全选后,单击“确定”,弹出一张转账凭证,单击保存
27、对账
以“陈明”的身份重新注册进入企业应用平台。
(1)执行“期末”|“对账”命令,进入“对账”窗口。
(2)将光标置于要进行对账的月份“20xx-12”,单击“选择”按钮
(3)单击“对账”按钮,开始自动对账,并显示对账结果。
(4)单击“试算”按钮。
(5)单击“确认”按钮。
28、结账
(1)执行“期未”|“结账”命令,进入“结账”窗口。
(2)单击要结账月份“20xx-12”,单击“下一步”按钮。
(3)单击“对账”按钮。
(4)单击“下一步”按钮,系统显示“20xx年12月工作报告”。
(5)查看工作报告后,单击“下一步”按钮,再单击“结账”按钮。
三、 实验数据记录、处理及结果分析保存
四、讨论、心得
在进行此实验的时候,我发现自己知识掌握的不够好,很多方面只了解了一些皮毛而已,没有深刻的理解。但是通过努力,我基本掌握了凭证的填制,凭证审核、记账的操作方法,学会了如何对已经记账凭证进行修改。此实验值得注意的是,未经审核的错误凭证可通过“填制凭证”功能直接修改;而已审核的凭证应先取消审核后,再进行修改;期末业务要用到一些公式的辅助,就要格外仔细记住公示的代表不要用错用混了,以免造成错误。在结账操作之前,应仔细检查本月凭证处理是否完成。若系统检查出总账与明细账对账不符,则不能结账。
这次实验,我们进行了电工实验。实验的目的是为了让我们了解电路的基本原理和基本电路元件的使用方法。
在实验中,我们首先学习了电路的基本理论和概念,然后进行了实际操作。我们使用了一些基本元件,如电阻器、电容器、二极管等,来搭建和测试电路。
通过这次实验,我深刻地感受到了电路的重要性和复杂性。电路中的每个元件都有其特定的功能和作用,而它们之间的相互作用也是非常复杂的。因此,我们需要对电路理论有深入的理解,才能正确地设计和搭建电路。
此外,我也学会了如何使用一些基本的电路元件,如电阻器、电容器、二极管等。我了解到每个元件都有其特定的电阻、电容、导电率等参数,这些参数决定了其在电路中的功能和作用。
最后,我认为这次实验让我更加深入地了解了电路的基本原理和基本电路元件的.使用方法,同时也增强了我的动手能力和解决问题的能力。我相信这些知识和经验将对我未来的学习和工作有很大的帮助。
以上是一份电工实验心得范例,您可以根据实际情况进行适当的修改。
一、原理
流感病毒颗粒表面的血凝素(HA)蛋白,具有识别并吸附于红细胞表面受体的结构,HA试验由此得名。HA蛋白的抗体与受体的特异性结合能够干扰HA蛋白与红细胞受体的结合从而出现抑制现象。
二、应用
该试验是目前WHO进行全球流感监测所普遍采用的试验方法。可用于流感病毒分离株HA亚型的鉴定,也可用来检测禽血清中是否有与抗原亚型一致的感染或免疫抗体。
三、缺点
只有当抗原和抗体HA亚型相一致时才能出现HI现象,各亚型间无明显交叉反应;除鸡血清以外,用鸡红细胞检测哺乳动物和水禽的血清时需要除去存在于血清中的非特异凝集素;需要在每次试验时进行抗原标准化;需要正确判读的技能。
四、试验步骤
1阿氏(Alsevers)液配制
称量葡萄糖2.05g、柠檬酸钠0.8g、柠檬酸0.055g、氯化钠0.42g,加蒸馏水至100mL,散热溶解后调pH值至6.1,
69kPa 15min高压灭菌,4℃保存备用。(3.8%枸橼酸钠(3.8g枸橼酸钠,100ml超纯水),101 kPa,20min高压灭菌,4℃保存备用,保存期1个月)。
210%和1%鸡红细胞液的制备
2.1采血
用注射器吸取阿氏液约1mL(3.8%枸橼酸钠),取至少2只SPF鸡(如果没有SPF鸡,可用常规试验证明体内无禽流感和新城疫抗体的鸡),采血约2~4mL,与阿氏液混合(3.8%枸橼酸钠),放入装10mL阿氏液(生理盐水)的离心管中混匀。
2.2洗涤鸡红细胞
将离心管中的血液经1500~1800 r/min离心8分钟,弃上清液,沉淀物加入阿氏液(生理盐水),轻轻混合,再经1500~1800 r/min离心8分钟,用吸管移去上清液及沉淀红细胞上层的白细胞薄膜,再重复2次以上过程后,加入阿氏液20 mL(生理盐水),轻轻混合成红细胞悬液,4℃保存备用,不超过5天。
2.310%鸡红细胞悬液
取阿氏液保存不超过5天的红细胞,在锥形刻度离心管中离心1500~1800 r/min 8分钟,弃去上清液,准确观察刻度离心管中红细胞体积(mL),加入9倍体积(mL)的生理盐水,用吸管反复吹吸使生理盐水与红细胞混合均匀。(此步
可省略,直接配制1%红细胞)
2.41%鸡红细胞液
取混合均匀的10%鸡红细胞悬液1 mL,加入9 mL生理盐水,混合均匀即可。(根据检测血清的数量,估算一下需要的1%鸡红细胞量,可按0.3ml/每份血清)
3抗原血凝效价测定(HA试验,微量法)
3.1在微量反应板的1孔~12孔均加入25μl PBS(生理盐水),换滴头。
3.2吸取25μl抗原加入第l孔,混匀。
3.3从第1孔吸取25μl,病毒液加入第2孔,混匀后吸取25μl加入第3孔,如此进行倍比稀释至第11孔,从第11孔吸取25μl弃之,换滴头。
3.4每孔再加入25μl PBS(生理盐水)。
3.5每孔均加入25μl体积分数为1%鸡红细胞悬液(将鸡红细胞悬液充分摇匀后加入)。
3.6振荡混匀,在室温(20~25℃)下静置40min后观察结果(如果环境温度太高,可置4℃环境下反应1小时)。对照孔红细胞将呈明显的钮扣状沉到孔底。
3.7结果判定将板倾斜,观察血凝板,判读结果。
能使红细胞完全凝集(100%凝集,++++)的抗原最高稀释度为该抗原的血凝效价,此效价为1个血凝单位(HAU)。注意对照孔应呈现完全不凝集(-),否则此次检验无效。
4血凝抑制(HI)试验(微量法)
4.1根据3的试验结果配制4HAU的病毒抗原。以完全血凝的病毒最高稀释倍数作为终点,终点稀释倍数除以4即为含4HAU的抗原的稀释倍数。例如,如果血凝的终点滴度为1:256,则4HAU抗原的稀释倍数应是1:64(256除以4)。
4.2在微量反应板的1孔~11孔加入25μl PBS(生理盐水),第12孔加入50μl PBS(生理盐水)。
4.3吸取25μl血清加入第1孔内,充分混匀后吸25μl于第2孔,依次倍比稀释至第10孔,从第10孔吸取25μl弃去。
4.4 1孔~11孔均加入含4HAU抗原25μl,室温(约20℃)静置至少30min。
4.5每孔加入25μl 1%的鸡红细胞悬液混匀,轻轻混匀,静置约40min(室温约20℃,若环境温度太高可置4℃条件下进行),对照红细胞将呈现钮扣状沉于孔底。
4.6结果判定
试验成立的条件:只有阴性对照孔血清滴度不大于21og2,阳性对照孔血清误差不超过1个滴度,试验结果才有效。
以完全抑制4HAU抗原的血清最高稀释倍数作为HI滴度。
HI价小于或等于31og2判定HI试验阴性;HI价大于或等于41og2为阳性。
五、HI试验注意事项
1、合理选择抗原和对照阳性血清。针对Re-4和Re-5株疫苗免疫采用相应抗原和对照阳性血清。
同一亚型的禽流感病毒制成的抗原,如果毒株来源不同,则可能会存在抗原性差异,从而使检测同一血清的结果有差别。一般来讲,疫苗种毒株如果与抗原所用毒株相同时,则所测得的HI效价较高。
2、合理使用和保存抗原。反应试剂要按规定保存和使用,冻干的试剂应按照说明中规定的体积重新溶解并保存。要避免杂菌污染,因为污染所造成的非流感起源的凝集素也可与所有抗血清发生非特异反应。为避免反复冻融和细菌污染,可以无菌操作将试剂分装成小包装。
3、反应温度不能太高。若在37℃(如温箱)下进行,
血凝抑制实验报告三随着养殖业的飞速发展和广大养殖户科学意识的不断提高,人们普遍认识到实验室检测技术在临床应用的重要性。下面简单介绍一下鸡新城疫微量血凝试验和血凝抑制试验的注意事项及操作方法。
应用:
用于新城疫、产蛋下降综合征和传梁性支气管炎等的母源抗体的检测、雏鸡首免日龄的确定、疫苗免疫后的免疫应答的监测、临床鸡病的鉴别诊断等。
下面以新城疫病毒为例,介绍血凝和血凝抑制试验的方法:
注意事项:
一、样本要具有代表性:所采样本要能代表整体,通常采用四角加中间的随机取样法,并且确定适当的样品数量,一般1000只以下的鸡群采样率在2~5%;5000只以下1~2%;5000只以上0.5~1%。对产蛋期间的鸡群可采鸡蛋;对雏鸡或青年鸡,可采血。方法是:取青霉素小瓶,洗净后用蒸馏水冲洗、控干水分,并注意不要用消毒剂,以免影响结果。每只鸡采血量在1ml左右,最好不低于1ml,在室温下静置至血清自然析出。
二、四单位抗原的准确性:要获得准确的监测效果,先做红血球的凝集试验,即测得抗原的血凝价,尔后前移2孔作为四单位抗原的稀释度。
三、红血球洗脱的充分性:原则上,新城疫检测所用的'红血球应来源于非疫苗免疫过的健康公鸡,但实际上却多采用免疫过疫苗的健康公鸡,有时甚至是病鸡。因此,对红血球的洗脱的次数要多、要充分,并注意转速和时间,通常采用五次变速离心法:前四次为每分钟1500转,每次5分钟,最后一次为每分钟3000转,持续7~8分钟。另外,洗红血球过程中,应注意动作要轻,玻璃仪器之间尽量减少碰撞,以免造成红血球破裂而影响结果。
四、结果判定的及时性:检测中,每次试验均应设抗原与生理盐水对照,加入红血球后,每隔5分钟观察一次,一旦两列对照孔图像清晰地显示出来时,应立即对样本进行结果判定,过早过晚都会影响判定结果的准确性。
血凝与血凝抑制试验的操作方法
一、材料与仪器:
新城疫抗原、1%鸡红血球、抗凝剂、生理盐水、被检血清、离心机、吸管、滴管、洗耳球、烧杯、量筒、注射器、长针头、96孔V型医用血凝板、微量移液器、微量振荡器、恒温培养箱、冰箱等。
二、方法:
1%鸡红血球的制备:
1.用长针刺入鸡心脏或翅下静脉,采血,采血量视用量而定,5%抗凝剂与全血的比例为1∶3~4。
2.洗血球:共洗4~5次,每次5~8分钟,红血球与生理盐水的比例至少为1∶2~3。离心机转速为每分钟1500~3000转,最后倾去上清。
3.吸红血球泥1ml加生理盐水99ml,配成1%红血球备用。
三、血凝试验:
1.血凝板上12个孔内全部加入生理盐水,每孔0.05ml,吸等量新城疫抗原于第一孔内,混匀后吸出同量于第二孔内混匀,以此类推稀释至第11孔,并弃去0.05ml,留第12孔作为生理盐水对照,然后全部孔内加入1%鸡红血球。
2.将血凝板置于振荡器上振荡1~2分钟,使材料充分混均,放入恒温培养箱,每5分钟观察一次,至10~15分钟取出,一般以生理盐水对照孔的图象清析地出现为准。
3.结果判定:红血球在反应板底部全部均匀铺开为完全凝集(++++),在血凝板底部集为一小红点为沉淀(-),如底部为一小红点,四周为凝集的红细胞,则为不完全凝集(++)。
4.出现完全凝集的抗原的最高稀释度,即为该抗原的凝集价。
5.四单位抗原的制备:血凝试验的结果如为28(256),则前移2孔即26(64),作为四单位抗原的稀释度。即:63ml生理盐水+1ml抗原即为四单位抗原。
四.血凝抑制试验:
1.血凝板上1~11孔全部加入0.05ml的生理盐水,于第一孔内加入等量的被检抗体,稀释至第10孔,弃去0.05ml,再加入等量的4单位新城疫抗原至第11孔,第11孔为抗原对照,12孔为生理盐水对照。在振荡器上振荡1~2分钟,放置室温约20分钟,然后加入等量的1%鸡红血球,振荡后放入恒温培养箱大约10~15分钟后进行结果判定。
2.结果:能完全抑制红细胞凝集的被检抗体的最高稀释度为该被检抗体的血凝抑制滴度。
注:1、HI价在23~24时免疫可产生良好的免疫应答,如在疫区可提高到24~25免疫。
2、24~25
注:#为完全抑制,++为不完全抑制,-为不抑制。